Bên cạnh những màn so kè vũ đạo với bạn bè trong khu vực Sàn Nhảy, game thủ 2U còn có cơ hội luyện tập và chinh phục những pha nhảy rất khó khăn trong khu vực Thử Thách. Đây cũng là tính năng khá mới lạ trong các trò chơi vũ đạo trực tuyến hiện nay.
Khu vực Thử Thách trong 2U được chia thành hai loại là Phòng luyện tập và Khiêu chiến vượt ải. Người chơi phải vượt qua được Phòng luyện tập mới có thể mở ra những kiến trúc sau.
Mặc dù Phòng luyện tập là ải đầu tiên giúp người chơi được trải nghiệm rõ nét hai kiểu nhảy truyền thống và sóng nhạc, nhưng những màn nhảy thực sự là một thử thách cho game thủ. Từ 1 – 2 phím mũi tên ban đầu, hệ thống sẽ tăng dần phím ký tự mũi tên bắt buộc các game thủ phải theo kịp. Ngay màn thử thách mở đầu này đã khiến nhiều game thủ phải xuýt xoa khi chỉ còn vài điểm nữa thôi là có thể mở được Cửa Cầu Vồng.
Các kiến trúc trong khu vực Thử Thách tượng trưng cho một cánh cổng. Mỗi cổng là một nhiệm vụ đưa người chơi vào một cốt truyện khác nhau, phải vượt qua cánh cổng thứ nhất mới có thể mở cánh cổng thứ hai.
Người chơi tham gia khu vực Thử Thách được tối đa 5 lần miễn phí mỗi ngày. Từng ải, người chơi sẽ phải nhảy theo bài hát mà hệ thống yêu cầu cũng như sẽ trải qua các sàn nhảy khác nhau.
Cách chơi theo hệ thống Thử Thách trong 2U rất mới lạ so với các trò chơi vũ đạo trên thị trường hiện nay. Người chơi sẽ được dẫn dắt qua nhiều tòa kiến trúc lạ mắt, ẩn chứa một câu chuyện để người chơi tự khám phá. Hoàn thành được các yêu cầu trong các thử thách này, game thủ sẽ nhận được rất nhiều điểm kinh nghiệm, tiền vàng, đặc biệt là điểm like dùng để thăng cấp tước vị trong game và mua một số vật phẩm thời trang thay cho tiền vàng.
